El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

La Tinción de Ziehl-Neelsen es una tinción para micobacterias.

Tomar una muestra del antebrazo o de la zona de detras de la oreja con un hisopo estéril y sembrar en la mitad de una placa con medio MSA (manitol sal agar), que es un medio selectivo para Staphylococcus. A continuación aplicar un desinfectante (alcohol) sobre esa zona y tomar otra muestra con un nuevo hisopo en la otra mitad de la placa.

Tomar una muestra de las amígdalas o de la faringe del compañero, mediante un hisopo estéril. Llevar la precaución de no tocar con el hisopo otras zonas que también poseen flora normal (piel, dientes, lengua, etc.).

En la observación microscópica las bacterias Gram-positivas aparecen teñidas de color violeta, y las Gram-negativas de rosa.

Tomar el tubo con el cultivo mixto, agitar para homogeneizar su contenido. Flamear el asa bacteriológica y tomar una muestra del cultivo. Flamear la boca del tubo tanto al abrirlo como antes de cerrarlo. En una placa con agar nutritivo y tocando con suavidad la superficie del medio, extender la muestra siguiendo el esquema de la figura. El recorrido del asa debe ser lo más largo posible con el fin de conseguir al final del mismo células aisladas que darán lugar a colonias. Al destapar la...

Esta técnica nos permite un doble objetivo, el aislamiento de colonias y además el recuento de los microorganismos que tenemos en el cultivo inicial. Se trabaja con cinco tubos con suero fisiológico estéril, uno de ellos con 10 ml y el resto con 9 ml, en el orden que se muestra en la figura. Mediante una pipeta estéril tomar 1 ml del cultivo mixto y depositarlo en el primer tubo. Agitar hasta conseguir una suspensión homogénea. Tomar otra pipeta estéril y de este primer tubo transferir 0,1 ml...

n la observación microscópica las esporas aparecen teñidas de verde y las células vegetativas de rosa.

Pone de manifiesto la presencia del enzima catalasa en una bacteria. Esta enzima es capaz de descomponer el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) en agua y oxígeno, con la consiguiente aparición de burbujas.

Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales amónicas inorgánicas como única fuente de nitrógeno, provocando la alcalinización del medio. El medio a utilizar es agar Citrato de Simons, que contiene citrato de sodio, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador de pH. Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con...

El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminación reductiva del triptófano y esta reacción es llevada a cabo por algunas bacterias que poseen las enzimas denominadas en su conjunto triptofanasas.Para detectar la producción de indol se utiliza el medio Caldo triptófano y la lectura de la prueba se realiza con el reactivo de Kovacs (alcohol isoamilo, p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado) con el que el indol producido reacciona generando una coloración rosa...

Con esta prueba se investiga la capacidad de las bacterias para reducir los nitratos convirtiéndolos en nitritos o en nitrógeno, es decir se estudia la presencia de nitrato reductasa y nitrito reductasa. Se utiliza el medio de cultivo caldo nitratos. Para revelar la presencia de nitritos en el medio se emplearán dos reactivos: reactivo A (ácido sulfamínico al 0.8% en ácido acético glacial 5N) y reactivo B (α-naftilamina al 0.5% en ácido acético glacial 5N) que se añadirán tras la incubación.

Con esta prueba se investiga la capacidad de las bacterias para reducir los nitratos convirtiéndolos en nitritos o en nitrógeno, es decir se estudia la presencia de nitrato reductasa y nitrito reductasa. Se utiliza el medio de cultivo caldo nitratos. Para revelar la presencia de nitritos en el medio se emplearán dos reactivos: reactivo A (ácido sulfamínico al 0.8% en ácido acético glacial 5N) y reactivo B (α-naftilamina al 0.5% en ácido acético glacial 5N) que se añadirán tras la incubación.

A partir de cultivos en medio líquido se carga el asa bacteriológica con una gota de de cultivo y se deposita en un portaobjetos limpio realizando una extensión de la muestra hasta conseguir una capa fina (frotis). Si partimos de un cultivo en medio sólido, primeramente dispondremos una pequeña gota de agua en el portaobjetos. A continuación se carga el asa con una pequeña cantidad de bacterias de una colonia del cultivo y se resuspende en la gota de agua, tras lo cual realizaremos el frotis.

El autoclave es un instrumento habitual en los laboratorios de Microbiología. Es un sistema cerrado donde se forma vapor de agua que se somete a una presión elevada, una atmósfera, lo que hace que el agua alcance una temperatura de 121ºC causando la desnaturalización de enzimas lo que conlleva a la muerte de los microorganismos y la destrucción de las esporas. Habitualmente, se esteriliza a 121ºC durante 20 minutos.

Se determina la capacidad de la bacteria para utilizar hidratos de carbono produciendo ácido o ácido y gas. Para ello se utiliza el medio con hierro de Kliger (Kliger Iron Agar o KIA), en el que también se puede observar la producción de sulfhídrico. Este medio contiene lactosa y glucosa como sustratos de carbono fermentables. Tiosulfato de sodio como sustrato necesario para la producción de sulfhídrico, citrato de hierro y amonio como fuente de iones de Fe+3 que se combinan con el ácido...

En el laboratorio de Microbiología aprenderemos diversas técnicas y procedimientos para el manejo de los microorganismos. Es importante conocer el instrumental y las normas de seguridad para su correcto manejo.

Las radiaciones electromagnéticas ionizantes son una forma de esterilización física muy efectiva pero su manejo se ve restringido por la necesidad de disponer de instalaciones especiales para la emisión radioactiva. Durante las prácticas se manejará material adquirido de casas comerciales esterilizado mediante radiación γ, una radiación muy penetrante y útil para la esterilización de material termolábil como el plástico.

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa sólo se encuentra en los organismos aerobios, algunos...

La filtración es un procedimiento físico de esterilización de fluidos en el cual los microorganismos no son destruidos, sino simplemente retenidos por un material filtrante. La filtración sólo puede ser utilizada con fluidos, sean líquidos o gaseosos. Se suele utilizar con soluciones cuyos componentes sean termolábiles y por lo tanto no pueden ser esterilizadas en el autoclave, por ejemplo, soluciones concentradas de azúcares, de urea, vitaminas, factores de crecimiento, etc.

El procedimiento es igual al del agotamiento de asa pero la muestra de cultivo se siembra siguiendo el esquema de la figura. Después de realizar la primera descarga se cierra la placa y se flamea el asa. Sin cargarla de nuevo, se gira la placa unos 45º y arrastrando del final de las estrías realizamos la segunda fase de las mismas, se repite el procedimiento dos veces más hasta la última estría que finaliza con un pequeño agotamiento en el centro de la superficie del medio de cultivo. La...

Para conocer la sensibilidad de una bacteria a distintos antibióticos se siembra una muestra del cultivo puro en un medio en el que conocemos la capacidad de difusión de cada una de las sustancias a testar. Este es el medio de Mueller Hinton.

El material y los medios de cultivo donde vamos a crecer a los microorganismos deben de ser utilizados en condiciones asépticas para evitar su contaminación con los microorganismos presentes en el medio ambiente. El mechero Bunsen no sólo permite crear una zona aséptica de trabajo, también nos permite esterilizar diverso instrumental como el asa de siembra o el asa de vidrio, mediante la aplicación directa de calor.